中文摘要：本发明公开了一种检测A型单端孢霉烯族毒素的LAMP引物组合和LAMP检测试剂盒和LAMP检测方法。该LAMP引物组合由正向外引物F3，反向外引物B3，正向内引物FIP，反向内引物BIP和反向环引物LB组成。本发明的检测方法可同时检测所有A型单端孢霉烯族毒素，并且特异性强、准确性高、操作简便、实用性好、实现了等温扩增，可用于A型单端孢霉烯族毒素的高灵敏度快速检测，易于大规模推广。
主权项：1.一种用于A型检测单端孢霉烯族毒素的LAMP引物组合，其特征在于由正向外引物F3，反向外引物B3，正向内引物FIP，反向内引物BIP，反向环引物LB组成，各引物序列如下：
FIP：5’-AATGCCACAGCAGACCCTGAGATCGTTTCGATAACGCTGGAG-3’；
BIP：5’-AAGAGGCTCATCGGGATCGGGACCCGTCAGCAAGACCAA-3’；
F3：5’-ATGCAGCGATGTITTGTTCG-3’；
B3：5’-ACTGATCTATGGGCCTCGT-3’；
LB：5’-TCTTCGGCTGCTGCACCT-3’。
2.权利要求1所述引物组合在检测A型单端孢霉烯族毒素中的应用。
3.一种检测A型单端孢霉烯族毒素的LAMP试剂盒，其特征在于，包含以下成分：
(1)含权利要求1所述的引物组混合液，浓度分别为：正向外引物F3 1μM、反向外引物B3 1μM、正向内引物FIP 8μM、反向内引物FIP 8μM、反向环引物2μM；
(2)反应液，包含：7mM dNTPs、100mM Tris-HCl，50mM KCl，50mM(NH 4) 2SO 4，40mM MgS0 4、0.5％Triton X-100、5M Betain、40U Bst DNA聚合酶、25mM羟基萘酚蓝；
(3)阳性对照为拟枝孢镰刀菌ITEM3593的基因组DNA，阴性对照为不含目的基因的反应混合液。
4.权利要求3所述的检测A型单端孢霉烯族毒素的LAMP试剂盒在检测A型单端孢霉烯族毒素中的应用。
5.一种检测A型单端孢霉烯族毒素的方法，其特征在于：包括提取待测材料的总DNA，以提取的DNA为模板，利用LAMP引物组或LAMP试剂盒进行LAMP扩增，观察反应溶液的颜色变化，显示紫色表示检测为阴性，不存在A型单端孢霉烯族毒素，而显示天蓝色的为阳性，样品中存在A型单端孢霉烯族毒素。
6.根据权利要求5所述的检测A型单端孢霉烯族毒素的方法，其特征在于：提取待测样品的总DNA，取1μL DNA溶液，加入5μL反应液、5μL引物组混合液、14μL灭菌超纯水进行LAMP反应，反应程序为60～65℃，时间为30～50min，扩增产物进行颜色变化的观察。
申请号：CN201510940476.8
专利号：CN106893761-A
公开/公告号：CN106893761A
申请/专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
发明/设计人：张昊；冯洁；徐进；许景升
分类号：C12Q1/68；C12Q1/04；C12N15/11；C12R1/77
主分类号：C12Q1/68
法律状态：公开发明
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