中文摘要：一种用于检测玉米赤霉烯酮的电化学免疫传感器及其制备与应用
主权项：1.一种用于检测玉米赤霉烯酮的电化学免疫传感器，包括工作电极、参比电极和对电 极，所述工作电极为先在基底电极表面修饰羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料，而后固 定玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶联物所得。
2.根据权利要求1所述的用于检测玉米赤霉烯酮的电化学免疫传感器，其特征在于，所述基底电极选自玻碳电极。
3.根据权利要求1所述的用于检测玉米赤霉烯酮的电化学免疫传感器，其特征在于，所述羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料(cMWCNTs-COOH/CS)中，羧基化多壁碳纳米管与壳聚糖的质量比为(0.5～12):1。
4.根据权利要求1所述的用于检测玉米赤霉烯酮的电化学免疫传感器，其特征在于，每平方毫米的工作电极上，所述羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料中羧基化多壁碳纳米管的质量为0.1～2.0ug。
5.根据权利要求1所述的用于检测玉米赤霉烯酮的电化学免疫传感器，其特征在于，每个所述工作电极上，所述羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料(cMWCNTs-COOH/CS)中羧基化多壁碳纳米管与玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶联物(ZEA-BSA)的质量比为(25～ 12000)：1。
6.如权利要求1～5任一项所述电化学免疫传感器中的工作电极的制备方法，所述方法为先在基底电极表面修饰羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料，而后再固定玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶联物。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述工作电极的制备方法包括如下步骤：
(1)制备羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料：将壳聚糖溶解于醋酸溶液中，制备壳聚糖溶液；将羧基化多壁碳纳米管溶解于所得壳聚糖溶液中，得羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料混悬液；
(2)工作电极的修饰及功能化：
1)基底电极表面处理：将基底电极表面进行抛光处理，使其表面光洁；
2)修饰羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料：将步骤(1)中制备的羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料混悬液涂到步骤1)中处理好的基底电极表面，晾干成膜，得到羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料修饰电极；
3)采用活化液活化所得羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料修饰电极中羧基化多壁碳纳米管上的羧基基团；
4)固定玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶联物：在活化后的羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料修饰电极上加玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶联物，孵育，即得工作电极。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：步骤(1)中，所述羧基化多壁碳纳米管/壳聚糖复合材料(cMWCNTs-COOH/CS)混悬液中，羧基化多壁碳纳米管(cMWCNTs-COOH)的终浓度为1～6mg/ml；步骤3)中，所述活化液为为EDC和NHS的混合液EDC/NHS；步骤4)中，玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶联物的浓度为0.001～2ug/ml。
9.一种检测玉米赤霉烯酮的检测体系，包括如权利要求1～5任一项所述电化学免疫传感器ZEA单克隆抗体、二抗和免疫反应缓冲体系。
10.根据权利要求9所述的检测体系，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：
(1)所述二抗为碱性磷酸酶标记二抗；(2)所述免疫反应缓冲体系为含α-NP的二乙醇胺缓冲液。
11.如权利要求1～5任一项所述电化学免疫传感器或如权利要求9～10任一项检测体系在检测玉米赤霉烯酮中的用途。
12.一种检测玉米赤霉烯酮的方法，为采用如权利要求1～5任一项所述电化学免疫传感器或如权利要求9～10任一项检测体系对样品中的玉米赤霉烯酮进行检测。
13.根据权利要求12所述的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(a)在如权利要求1～5任一项所述电化学免疫传感器的工作电极上同时加入样品溶液和一定量ZEA单克隆抗体溶液，孵育；
(b)加入适量的碱性磷酸酶标记的二抗，孵育，通过与ZEA单克隆抗体选择性地结合到电极表面；
(c)将工作电极置于免疫反应缓冲体系中，并将工作电极、参比电极以及对电极正确连接到电化学工作站上，用差分脉冲伏安进行测定。
14.根据权利要求13所述的检测方法，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：
(1)步骤(a)中，ZEA单克隆抗体溶液的浓度为1～40ug/ml；(2)步骤(a)中，孵育时间为10～50min；(3)步骤(b)中，所述碱性磷酸酶标记二抗为碱性磷酸酶标记兔抗人IgG；(4)步骤(b)中，所述碱性磷酸酶标记二抗的浓度为2～20ug/ml；(5)步骤(c)中，所述参比电极选自饱和甘汞电极或银氯化银电极之任意一种；(6)步骤(c)中，所述对电极为铂丝电极；(7) 步骤(c)中，所述免疫反应缓冲体系为含α-NP的二乙醇胺缓冲液；(8)步骤(c)中，所述免疫 反应缓冲体系的pH为5.6～13。
申请号：CN201710186775.6
专利号：CN106872707-A
公开/公告号：CN106872707A
申请/专利权人：重庆医科大学
发明/设计人：李朝睿；徐玮；邱景富
分类号：G01N33/577；G01N33/561；G01N33/535
主分类号：G01N33/577
法律状态：实质审查
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