中文摘要：本发明涉及净化伏马毒素B1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮免疫吸附剂及复合亲和柱。所述的免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体上偶联的伏马毒素B1单克隆抗体、黄曲霉毒素单克隆抗体、赭曲霉毒素A单克隆抗体、玉米赤霉烯酮单克隆抗体，所述的伏马毒素抗体为由保藏编号为CCTCC NO.C201636的杂交瘤细胞株Fm7A11分泌产生的单克隆抗体，所述的杂交瘤细胞株Fm7A11已于2016年3月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学。装载有权利要求1所述的伏马毒素B1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮抗体免疫吸附剂的净化伏马毒素B1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮复合亲和柱。此复合亲和柱可同时用于伏马毒素B1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮毒素样品的净化检测。
主权项：1.伏马毒素B 1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮抗体免疫吸附剂，其特征在于： 所述的免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体上偶联的伏马毒素B1单克隆抗体、黄曲霉 毒素单克隆抗体、赭曲霉毒素A单克隆抗体、玉米赤霉烯酮单克隆抗体，所述的伏马毒素抗 体为由保藏编号为CCTCC NO.C201636的杂交瘤细胞株Fm7A11分泌产生的单克隆抗体，所述的杂交瘤细胞株Fm7A11已于2016年3月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO.C201636。
2.根据权利要求1所述的伏马毒素B 1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮抗体免 疫吸附剂，其特征在于：所述固相载体为琼脂糖凝胶。
3.装载有权利要求1所述的伏马毒素B 1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮抗体 免疫吸附剂的净化伏马毒素B 1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮复合亲和柱。
4.权利要求1所述的净化伏马毒素B 1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮复合亲 和柱的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
a)基质制备
将CNBr活化的琼脂糖凝胶基质粉末在pH2-3的条件下用HCl洗涤除杂；
b)配体偶联
使用偶联缓冲液溶解待偶联的伏马毒素B1单克隆抗体、黄曲霉毒素B1单克隆抗体、赭曲霉毒素A单克隆抗体、玉米赤霉烯酮单克隆抗体，获得抗体溶液，迅速将步骤a)活化的琼 脂糖凝胶基质转移到上述抗体溶液中，室温条件(20-25℃)下充分混匀上述混和物2-4h；
c)配体封闭
封闭所有残留的活性基团；
d)除去偶联后未偶联上的多余的配体；
e)装柱。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤a)中洗涤用HCl浓度为1mmol/L，洗涤时间为15min。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤b)中的偶联缓冲液为0.2mol/L Na 2HCO 3，pH8.3，每个抗体溶液浓度为10-15mg/mL。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤c)的配体封闭过程为：转移经步骤b)处理的琼脂糖凝胶基质至0.1mol/LTris-HCl缓冲液中，室温条件下静置2-4h。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤d)为：依次用pH值为4和pH值为8 的缓冲液对经步骤c)处理后的琼脂糖凝胶基质进行洗涤，至少洗涤3个循环；
pH值为4和pH值为8的缓冲液分别可选0.1mol/L醋酸/醋酸钠缓冲液和0.1mol/L Tris- HCl缓冲液。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤e)为用5倍所述琼脂糖凝胶体积的0.01％NaN 3-PBS洗涤，并使用0.01％NaN 3-PBS保存，然后装柱。
10.基于上述权利要求3所述的复合亲和柱检测伏马毒素B 1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒A 和玉米赤霉烯酮含量的方法，其特征在于：将待测样品通过免疫亲和柱，免疫吸附剂会特异性的吸附伏马毒素B 1、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮，其他的杂质则流出免疫亲和柱，然后用色谱级甲醇洗脱亲和柱，收集洗脱液即净化浓缩后的样品供高效液相色谱-质谱联用仪检测，得各毒素含量。
申请号：CN201710134053.6
专利号：CN106977600-A
公开/公告号：CN106977600A
申请/专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
发明/设计人：李培武；胡小风；张兆威；张奇；张文；唐晓倩
分类号：C07K16/14；G01N33/577；G01N30/02；B01J20/286；B01D15/22；B01D15/20
主分类号：C07K16/14
法律状态：实质审查
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