中文摘要:本发明涉及一种玉米赤霉烯酮适配体亲和柱及其制备方法和用途。该亲和纯化柱利用化学修饰的固相载体,然后用玉米赤霉烯酮的核酸适配体与载体进行共价偶联。然后装填亲和柱。该适配体亲和柱主要用于对于食品、饲料、牛奶、血样以及其他多种样本中的玉米赤霉烯酮的纯化,以便于后期对样本中玉米赤霉烯酮的高效液相色谱(HPLC)检测和荧光检测。
主权项:1.一种玉米赤霉烯酮的亲和柱,其特征在于包含有载体和玉米赤霉烯酮适配体。
2.根据权利要求1中所述的亲和柱,其特征在于适配体通过化学键偶联在载体上。
3.根据权利要求1中所述的亲和柱,其特征在于所述的适配体是核酸适配体,更具体的是寡聚脱氧核苷酸适配体。
4.根据权利要求3中所述的核酸适配体,其特征在于所述的适配体序列为序列1所描述的核酸序列。
5.根据权利要求1中所描述的适配体,其特征在于适配体是经过化学修饰的适配体。
6.根据权利要求5中所描述的适配体,其特征在于修饰方式包括但不限于氨基修饰、羧基修饰、巯基修饰及生物素修饰。
7.根据权利要求1中所述的适配体亲和柱,其特征在于所述的载体是琼脂糖凝胶或者化学合成的固相载体。
8.根据权利要求5中所述的亲和柱,其特征在于所述的琼脂糖凝胶包含但不限于N-羟基琥珀酰亚胺活化的琼脂糖凝胶、溴化氰活化的琼脂糖凝胶、交联的琼脂糖凝胶、聚丙烯酸琼脂糖凝胶、。
9.根据权利要求5中所描述的化学合成的固相载体载体,包括但不限于聚苯乙烯,多孔聚苯乙烯及交联多孔聚苯乙烯填料。
10.一种纯化玉米赤霉烯酮亲和柱制备方法,其特征在于
选择N-羟基琥珀酰亚胺活化后的载体,将载体干粉用1mmol/L的盐酸浸泡过夜进行活化
每克活化的载体加入30-200nmol的适配体,在0.1M NaHCO 3,0.5M NaCl PH8.3的缓冲液中,室温偶联2小时;或者4℃偶联过夜
偶联产物用1M Tris.HCl PH 8.0 室温反应2小时
偶联好的载体-适配体,用20mM PH7.4的PBS洗涤
用含有0.01%硫柳汞的10mM PBS PH7.4 洗涤玉米赤霉烯酮适配体-载体偶联产物,装柱,放于4℃保存。
11.一种玉米赤霉烯酮的亲和柱,其用途在于对待检物中的玉米赤霉烯酮的富集和纯化。
12.根据权利要求11所述的待检物,其特征在于待检物包含但不限于粮食、饲料、牛奶及乳制品、水产、血液、尿液和水。
申请号:CN201710049292.1
专利号:CN106823467-A
公开/公告号:CN106823467A
申请/专利权人:北京美正生物科技有限公司
发明/设计人:张彦明
分类号:B01D15/38;G01N1/34
主分类号:B01D15/38
法律状态:实质审查
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