中文摘要：本发明提供了一种同时测定中成药中黄曲霉素B1，B2含量的方法，本发明采用正硅酸乙酯?3?氨基丙基三乙氧基硅烷修饰四氧化三铁磁性纳米颗粒作为磁性固相萃取的吸附剂，首次将其使用于黄曲霉毒素B1，B2的富集中，具有操作简便、成本低、准确度高等特点；本发明所建立的高灵敏度的磁性纳米颗粒?高效液相色谱荧光法，对具有复杂物质体系的中成药中黄曲霉毒素B1，B2同时进行含量测定研究，具有成本低、选择性高等优点，为更好地保障中药安全性提供了技术支持。
主权项：1.一种同时测定中成药中黄曲霉素B 1，B 2含量的方法，其特征在于，所述的方法为：
(1)制备供试品溶液
取待测中成药加入纯水中，超声分散均匀，调节pH至2～5，然后加入磁性纳米颗粒，搅 拌吸附得到混合液；所得混合液经外加磁场作用分层，倾除上层清液，在下层沉淀中加入二氯甲烷和丙酮体积比2：1的混合溶剂，搅拌解吸附，之后经外加磁场作用分层，收集上层清液，室温下自然挥干后，剩余物质用无水甲醇复溶，过滤膜，收集滤液即得供试品溶液；
所得供试品溶液的浓度范围为：0.3～3.4ng剩余物质/mL无水甲醇；
所述的磁性纳米颗粒为：正硅酸乙酯-3-氨基丙基三乙氧基硅烷修饰四氧化三铁磁性纳米颗粒；
(2)供试品溶液检测
取步骤(1)制备的供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到供试品溶液的高效液相色谱图；所述高效液相色谱的检测条件为：以粒径≤5μm的碳十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；以乙腈、甲醇、体积浓度0.1％甲酸水溶液的混合液为流动相，流速：0.8～1.2mL/ min；柱温：20～30℃；荧光检测器；理论板数按黄曲霉素B 1峰计算应不低于3000；
所述的流动相中，乙腈、甲醇、体积浓度0.1％甲酸水溶液三者的体积百分数分别为10％～25％、10％～25％、50％～80％；
所述荧光检测器激发波长：360nm，发射波长：440nm；
(3)建立标准曲线
称取黄曲霉素B 1，B 2标准品，用甲醇配制成混合标准品溶液，取不同量的混合标准品溶液，在与步骤(2)相同的高效液相色谱检测条件下分别进行检测，得到混合标准品溶液的高效液相色谱图；以混合标准品溶液中标准品黄曲霉素B 1，B 2各自的进样质量为横坐标、混合标准品溶液的高效液相色谱图中标准品黄曲霉素B 1，B 2各自的吸收峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得到黄曲霉素B 1，B 2各自的标准曲线和线性回归方程；
所述混合标准品溶液中，标准品黄曲霉素B 1的浓度为0.3～10ng/mL，标准品黄曲霉素B 2的浓度为0.03～5ng/mL；
(4)待测样品结果测定
将步骤(2)供试品溶液的高效液相色谱图中黄曲霉素B 1，B 2相应吸收峰的峰面积数值代入步骤(3)建立的线性回归方程中，计算得到供试品溶液中黄曲霉素B 1，B 2的含量，进而推算出待测中成药中黄曲霉素B 1，B 2的含量。
2.如权利要求1所述的一种同时测定中成药中黄曲霉素B 1，B 2含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述纯水的体积用量以待测中成药的质量计为3～7mL/g。
3.如权利要求1所述的一种同时测定中成药中黄曲霉素B 1，B 2含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的待测中成药为固体制剂，所述磁性纳米颗粒与待测中成药的质量比为0.01～0.02∶1。
4.如权利要求1所述的一种同时测定中成药中黄曲霉素B 1，B 2含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的待测中成药为液体制剂，所述磁性纳米颗粒的质量用量以待测中成药的体积计为10～20mg/mL。
5.如权利要求1所述的一种同时测定中成药中黄曲霉素B 1，B 2含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述搅拌吸附的时间为5～15min。
6.如权利要求1所述的一种同时测定中成药中黄曲霉素B 1，B 2含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述二氯甲烷和丙酮体积比2：1的混合溶剂的体积用量以待测中成药的质量计为0.3～1.8mL/g。
7.如权利要求1所述的一种同时测定中成药中黄曲霉素B 1，B 2含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述搅拌解吸附的时间为2～10min。
8.如权利要求1所述的一种同时测定中成药中黄曲霉素B 1，B 2含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的流动相中，乙腈、甲醇、体积浓度0.1％甲酸水溶液三者的体积百分数分别为20％、20％、60％。
9.如权利要求1所述的一种同时测定中成药中黄曲霉素B 1，B 2含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的色谱柱为C 18柱，4.6mm×250mm，所述C 18柱中填充剂碳十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为5μm或3.5μm。
10.如权利要求1所述的一种同时测定中成药中黄曲霉素B 1，B 2含量的方法，其特征在于，所述的正硅酸乙酯-3-氨基丙基三乙氧基硅烷修饰四氧化三铁磁性纳米颗粒按如下方法制备得到：
(a)将FeCl 3·6H 2O、FeCl 2·4H 2O与去离子水混合，在氮气保护下，85℃水浴加热并搅拌30min，然后注入氨水，接着继续于85℃反应30min，之后离心，取沉淀依次用去离子水、0.02mol/L氯化钠水溶液洗涤，40～60℃下干燥36h，得到四氧化三铁磁性纳米颗粒；
所述FeCl 3·6H 2O与FeCl 2·4H 2O的质量比为2～3：1；
所述去离子水的体积用量以FeCl 3·6H 2O和FeCl 2·4H 2O的总质量计为12～13mL/g；
所述氨水的体积用量以FeCl 3·6H 2O和FeCl 2·4H 2O的总质量计为1.4～1.8mL/g；
(b)将步骤(a)所得四氧化三铁磁性纳米颗粒溶解在甲醇与纯水体积比3～4：1的混合溶液中，在超声波功率为600W的条件下超声10min，然后加入氨水、正硅酸乙酯，室温搅拌10h，之后经外加磁场分层，倾除上清液，收集沉淀置于40～60℃真空干燥箱中干燥24h，研磨后得到TEOS-MNPs磁性纳米颗粒；
所述甲醇与纯水混合溶液的体积用量以四氧化三铁磁性纳米颗粒的质量计为200～ 300mL/g；
所述氨水的体积用量以四氧化三铁磁性纳米颗粒的质量计为20～30mL/g；
所述正硅酸乙酯的体积用量以四氧化三铁磁性纳米颗粒的质量计为0.5～1.0mL/g；
(c)将步骤(b)所得TEOS-MNPs磁性纳米颗粒与3-氨基丙基三乙氧基硅烷、甲苯混合，升温至110℃回流10h，之后经外加磁场分层，倾除上清液，收集沉淀置于45～60℃真空干燥箱中干燥24h，研磨后即得所述的APTES-TEOS-MNPs磁性纳米颗粒；
所述3-氨基丙基三乙氧基硅烷的体积用量以TEOS-MNPs磁性纳米颗粒的质量计为10～ 15mL/g；
所述甲苯的体积用量以TEOS-MNPs磁性纳米颗粒的质量计为100～150mL/g。
申请号：CN201710123086.0
专利号：CN106770806-A
公开/公告号：CN106770806A
申请/专利权人：浙江工业大学
发明/设计人：楚楚；李清；魏蒙蒙；王珊；颜继忠
分类号：G01N30/02；G01N30/08；G01N30/74
主分类号：G01N30/02
法律状态：实质审查
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