中文摘要：本发明提供了一种低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其包括以下步骤，先配制黄曲霉毒素B1、碱性橙II及碱性嫩黄O的溶液，稀释成不同浓度的标准工作液，并检测标准工作液的液相色谱图，并制作校正曲线；制备低共熔溶剂，低共熔溶剂包括氢键受体化合物和氢键供体化合物；称取调味油样品，加入低共熔溶剂和烷烃试剂，进行萃取，离心后去除上面的油层，剩余物用烷烃洗涤后采用液相色谱仪进行检测得到样品的色谱图；将样品的色谱图与标准工作液的色谱图进行比较定性，再根据峰面积所对应的标准曲线上的浓度进行定量。本发明的技术方案实用性强，操作简单，不需要复杂的前处理过程，实验成本低。
主权项：1.一种低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其特征在于：其包括以下步骤：
步骤S1：配制碱性橙II和碱性嫩黄O的混合标准液，并稀释成不同浓度的标准工作液，分别采用液相色谱仪进行检测得到不同浓度的碱性橙II和碱性嫩黄O标准工作液的液相色谱图，根据液相色谱图的峰面积和对应的浓度制作碱性橙II和碱性嫩黄O的校正曲线；配制黄曲霉毒素B1标准液，并分别稀释成不同浓度的黄曲霉毒素B1的标准工作液，分别采用液相色谱仪进行检测得到不同浓度黄曲霉毒素B1标准工作液的液相色谱图，根据液相色谱图的峰面积和对应的浓度制作黄曲霉毒素B1的校正曲线；
步骤S2：制备低共熔溶剂，所述低共熔溶剂包括氢键受体化合物和氢键供体化合物；
步骤S3：称取调味油样品，加入步骤S2中所述低共熔溶剂和烷烃试剂，进行震荡萃取，离心后去除上面的油层，剩余物采用液相色谱仪进行检测得到样品的色谱图；其中，所述低共熔溶剂和烷烃试剂的体积比大于0.0025；
步骤S4：将样品的色谱图与碱性橙II和碱性嫩黄O标准工作液的液相色谱图、以及黄曲霉毒素B1标准工作液的液相色谱图进行比较确定是否含有碱性橙II、碱性嫩黄O、黄曲霉毒素B1，如果确定含有碱性橙II和碱性嫩黄O，再根据样品的色谱图峰面积所对应的标准曲线上的浓度确定样品中碱性橙II和碱性嫩黄O的含量；如果确定含有黄曲霉毒素B1，再根据样品的色谱图峰面积所对应的标准曲线上的浓度确定样品中黄曲霉毒素B1的含量。
2.根据权利要求1所述的低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其特征在于：所述氢键供体化合物为尿素和醇类中的至少一种，所述氢键受体化合物与氢键供体化合物的摩尔比为1：（1~3）；所述低共熔溶剂的用量按照每 克调味油样品0.05~5.0 mL。
3.根据权利要求2所述的低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其特征在于：所述氢键受体化合物为甜菜碱，所述甜菜碱与所述氢键供体化合物的摩尔比为1:1、1:2或1:3。
4.根据权利要求3所述的低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其特征在于：所述氢键供体化合物为尿素。
5.根据权利要求1~4任意一项所述的低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其特征在于：所述烷烃试剂包括正己烷、环己烷、辛烷、庚烷中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其特征在于：所述低共熔溶剂和烷烃试剂的体积比为0.5~5。
7.根据权利要求6所述的低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其特征在于：所述烷烃试剂为正己烷或正庚烷。
8.根据权利要求1~4任意一项所述的低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其特征在于：步骤S3中，所述萃取的方式为摇床震荡提取或超声波提取，所述提取的温度在10-50℃。
9.根据权利要求1~4任意一项所述的低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其特征在于：步骤S3中，剩余物用烷烃洗涤除去残留的油，然后将低共熔溶剂直接上机或者定容到所需要的体积后上机检测。
10.根据权利要求1~4任意一项所述的低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定黄曲霉毒素B1、碱性橙II和碱性嫩黄O的方法，其特征在于：步骤S3中，所述剩余物用烷烃洗涤后再采用液相色谱仪进行测试。
申请号：CN201610853014.7
专利号：CN106290689-A
公开/公告号：CN106290689A
申请/专利权人：深圳市计量质量检测研究院
发明/设计人：杜业刚；王韦达；肖泽恩；张浩英；李芸；李碧芳；杨国武
分类号：G01N30/88；G01N30/02；G01N30/06；G01N30/14；G01N30/74
主分类号：G01N30/88
法律状态：审定授权
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