中文摘要：本发明公开了一种大米中黄曲霉毒素B1(AFB1)的胶体金免疫层析检测方法，包含以下步骤：采用还原法还原HAuCl4水溶液制备胶体金，将胶体金与抗AFB1单克隆抗体混合均匀，得金标AFB1单克隆抗体作为分析探针；将检测线AFB1-BSA偶联物和质控线羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上，建立AFB1的胶体金免疫层析检测体系(GICA)；将大米样品溶液缓慢滴加于分析探针上，观察检测线和质控线的颜色变化，当样品中AFB1浓度低于限值时，检测线和质控线均为红色；高于限值时，仅质控线为红色；本发明的胶体金免疫层析技术作为一种新型检测技术，无需借助仪器，具有操作简单、快速，检测结果及时、准确等优点，适用于对AFB1进行现场检测，在食品安全检测领域具有广阔的应用前景。
主权项：1.一种大米中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析检测方法，其特征在于，所述方法包含 以下步骤：
(1)抗AFB1单克隆抗体的制备与纯化：将稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2A5接种于BALB/c小鼠腹腔，通过体内诱生制备抗AFB1的腹水抗体，然后将所述腹水抗体采用亲和层析纯化得高纯度的抗AFB1单克隆抗体；
(2)胶体金免疫层析检测体系的制备：采用还原剂还原HAuCl 4水溶液制备胶体金，将所述胶体金与所述步骤(1)中抗AFB1单克隆抗体混合均匀得金标AFB1单克隆抗体，作为分析探针；将作为检测线的AFB1-BSA偶联物和作为质控线的羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上，建立AFB1的胶体金免疫层析检测体系；
(3)大米样品溶液AFB1的检测：制备大米样品溶液，缓慢滴加于所述步骤(2)中分析探针上，依据检测条件，观察检测线和质控线的颜色变化，当样品中AFB1浓度低于限值时，检测线和质控线均为红色；高于限值时，仅质控线为红色。
2.根据权利要求1所述的一种大米中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析检测方法，其特征在于，所述胶体金制备方法包括:取0.01wt％HAuCl 4水溶液100ml，加热煮沸30min，迅速加入1wt％还原剂枸橼酸三钠水溶液0.75ml-4ml，继续煮沸约5min，出现橙红色；所述胶体金颗粒粒径为15nm-50nm。
3.根据权利要求1所述的一种大米中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析检测方法，其特征在于，所述胶体金颗粒粒径为20nm-25nm。
4.根据权利要求1所述的一种大米中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析检测方法，其特征在于，所述的金标AFB1单克隆抗体中所述抗AFB1单克隆抗体和所述胶体金的标记量为15 μg：1mL。
5.根据权利要求1所述的一种大米中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析检测方法，其特征在于，所述大米样品溶液的制备方法包括：称取粉碎均质后的大米样品2.0g，置50ml离心管中，加入洗脱剂3-6ml，旋涡混合4min，在4000r/min下离心4min，精密量取上清液1ml，过0.2um滤膜即得。
6.根据权利要求1所述的一种大米中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析检测方法，其特征在于，所述洗脱剂包含甲醇、乙酸乙酯、乙腈中的一种。
7.根据权利要求1所述的一种大米中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析检测方法，其特征在于，所述检测条件包括：标记pH值为7.5，所述AFB1-BSA偶联物浓度为10μg/mL，所述羊抗鼠IgG为原液时，肉眼判定AFB1检测限值为10ng/mL，检测时间为10-15min；当样品中不含有AFB1或AFB1含量低于10ng/mL，所述检测线和质控线呈现红色条带，测试样品为阴性；当样品中AFB1含量超过10ng/mL，所述质控线呈现红色条带，测试样品为阳性。
申请号：CN201710315041.3
专利号：CN106990236-A
公开/公告号：CN106990236A
申请/专利权人：莆田方家铺子食品营养研究中心
发明/设计人：方敏
分类号：G01N33/558；G01N33/577
主分类号：G01N33/558
法律状态：实质审查
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