外文摘要：
NOVELTY - Kit comprises reaction solution 1 comprising 10l of 10 mu mol/l deoxynucleoside triphosphate, 1l of 10x ThermoPol (RTM: Reaction buffer), 150 mmol/l magnesium sulfate, 5l of 5 mol/l betaine and 6.5l sterilized double distilled water; reaction solution 2 comprising 0.5 mu l of 10 mu mol/l outer primer 1, 0.5 mu l of 10 mu mol/l outer primer 2, 1 mu l of 40 mu mol/l inner primer 1 and 1 mu l of 40 mu mol/l inner primer 2; 8U/ mu l Bst DNA polymerase; and 10 wt.% SYBR (RTM: Fluorescent dye) Green I. USE - Kit for detecting bacteria by loop-mediated isothermal gene amplification (claimed). ADVANTAGE - The kit enables detection with short detection time and strong specificity in simple manner, and ensures *food* safety.
主权项：
1.绿色魏斯氏菌环介导恒温基因扩增快速检测试剂盒，其特征在于包括：
（1）反应液1：由10mmol/L脱氧核苷三磷酸、10×ThermoPol Buffer反应缓冲液、 150mmol/L硫酸镁、5mol/L甜菜碱和灭菌双蒸水组成；
（2）反应液2：由10μmol/L外引物1、10μmol/L外引物2、40μmol/L内引物1和40μmol/L内 引物2组成，引物序列如下：
外引物1：CTTTGCTCAACGCAACAG、
外引物2：ATTTTCGCGTCGCTCATG、
内引物1：ACCTGCATTAACGCTTGGTG-GAAGTGGGCAATCATTTGG、
内引物2：TAGATGAATACGCATCAAACGCT-CTAACTGTCGATACTCCGC；
（3）8U/μL Bst DNA聚合酶；
（4）显色剂：10wt% SYBR Green I荧光染料；
上述环介导恒温基因扩增快速检测试剂盒中反应液1折合每样品19μL，其组成为： 10mmol/L脱氧核苷三磷酸4μL、10×ThermoPol Buffer反应缓冲液2.5μL、150mmol/L硫酸镁 1μL、5mol/L甜菜碱5μL和灭菌双蒸水6.5μL；反应液2折合每样品3μL，其组成为：10μmol/L外 引物1 0.5μL、10μmol/L外引物2 0.5μL、40μmol/L内引物1 1μL和40μmol/L内引物2 1μL。
2.一种权利要求1所述的绿色魏斯氏菌环介导恒温基因扩增快速检测试剂盒的检测方 法，其特征在于具体步骤为：
步骤（1），提取待检样品的基因组DNA
采用试剂盒提取法制备待检样品基因组DNA；
步骤（2），环介导恒温扩增反应
首先取2μL待检样品基因组DNA溶液，加入19μL反应液1、3μL反应液2和1μL Bst DNA聚 合酶，再将配置好的反应体系于65℃扩增反应50-70min后取出待检；
步骤（3），分析判断反应结果
在反应产物中加入1μL显色剂，混匀，静置2min，若反应液显现绿色即为阳性，橙色则为 阴性。
申请号： CN201610593823.9
公开/公告号：CN106086206A
申请日：2016-07-26
公开/公告日：2016-11-09
申请/专利权人：河南师范大学
发明/设计人： 姜晓冰;于涛;田金河;董斌;周丹蕾;任敏
分类号： C12Q1/68 C12Q1/04
主分类号： C12Q1/68
法律状态：审中-实质审查
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