外文摘要：NOVELTY - Detection of organic phosphorus pesticide residue in vegetable involves crushing dried vegetables, extracting using polyoxyethylene mono-tert-octylphenyl ether aqueous solution (s1), adding e.g. inorganic salt, centrifuging, filtering, obtaining a purified sample solution, processing non-pesticide vegetable, obtaining blank solution, detecting absorbance value, obtaining a standard curve, adding butyrylcholinesterase solution and color reagent to sample solution, separating supernatant, measuring absorbance and calculating organic phosphorus pesticide residue using standard curve.
USE - Detection of organic phosphorus pesticide residue in vegetable (claimed).
ADVANTAGE - The method enables detection of organic phosphorus pesticide residue in vegetable within short period of time.
主权项：
1.一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于，步骤如下：
1)提取：将蔬菜烘干，粉碎，获得蔬菜粉末，将蔬菜粉末加入到离心管中， 再加入聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液，在80-100kHz下超声提取lO-20min， 并在转速为3000-3500rpm条件下离心15-20min，取上层萃取液；
2)富集净化：向上层萃取液中加入无机盐，搅拌混合均匀，再加入已活化 的吸附剂，在60-70℃条件下水浴30-35min，然后在转速为3000-3500rpm离心 15-20min，取上层溶液，向上层溶液中加入甲醇，过滤后获得富集净化液；
3)空白样品测试：取不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白 富集净化液，向空白富集净化液中加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂， 摇匀后，在35-40℃下水浴20-30min，在转速5000-6000rpm下离心8-10min， 取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A 0，再加入0.1mL 底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出 反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A 0；
4)标准曲线的制作：另取5份不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)， 获取空白富集净化液，分别向其中加入有机磷农药标品使其终浓度分别为0.01、 0.1、1、10、100mg/mL，然后再分别加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色 剂，摇匀后，在35-40℃下水浴20-30min，在转速5000-6000rpm下离心8-10min， 取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A 0，再加入0.1mL 底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出 反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A 1；然后将本步骤4)中的前 述过程重复做三次，并求得变化量△A 1的平均值，并计算出上述0.01、0.1、1、 10、100mg/mL的不同浓度的有机磷农药溶液对酶的抑制率，分别对有机磷农药 标准品的不同浓度取log 10，以对有机磷农药标准品的不同浓度取log 10为底得到 的对数值为横坐标，以其抑制率为纵坐标，并作出标准曲线，求出该标准曲线的 回归方程；
5)待测蔬菜样品的测定：取待测蔬菜样品，按照步骤1)和步骤2)，获取 待测富集净化液，向待测富集净化液加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色 剂，摇匀后，在35-40℃下水浴20-30min，在转速5000-6000rpm下离心8-10min， 取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A 2，再加入0.1mL 底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出 反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A 2；然后将本步骤5)中的前述 过程重复做三次，并求得变化量△A 2的平均值，并计算出其抑制率，将该抑制率 代入所述标准曲线的回归方程，就可以计算出待测蔬菜中有机磷农药的残留量。
2.根据权利要求1所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于， 步骤1)中所述的蔬菜粉末的质量与聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液的体积比为 1g:(28-35)mL；步骤1)中所述的聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙烯单 叔辛基苯基醚的体积浓度为1.5-2％。
3.根据权利要求1所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于， 步骤2)中所述无机盐的质量与上层萃取液的体积比为1g：(8-10)mL；步骤2) 中所述已活化的吸附剂的质量与上层萃取液的体积比为1g：(4-6)mL；所述的上 层溶液与甲醇的体积比为1:(1-1.5)。
4.根据权利要求1或2或3所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其 特征在于，步骤2)中所述已活化的吸附剂为活化活性炭或活化硅藻土。
5.根据权利要求4所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于， 所述显色剂的制备方法为：称取80mg二硫化二硝基苯甲酸和7.8mg碳酸氢钠， 用缓冲溶液溶解，并定容至10ml后保存。
6.根据权利要求5所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于， 所述底物碘化硫代丁酸胆碱溶液的制备方法为：称取24mg碘化硫代丁酸胆碱， 加入3.0ml蒸馏水，充分摇匀溶解后保存。
7.根据权利要求6所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于， 所述抑制率(％)＝[(△A-△A 0)/△A 0]×100％，其中：公式中△A 0表示对照溶液反 应前后的吸光度的变化量；△A表示样品溶液反应前后的吸光度的变化量。
申请号： CN201610195132.3
公开/公告号： CN105891200A
申请日：2016-03-31
公开/公告日：2016-08-24
申请/专利权人：山东五洲检测有限公司
发明/设计人： 蒋灿;宋晓平
分类号： G01N21/78 G01N21/31
主分类号： G01N21/78
法律状态：审中-实质审查
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