外文摘要：NOVELTY - Detecting pesticide residue involves preparing test reagent by mixing phosphate buffer, color reagent, substrate and acetylcholinesterase solution and maintained pH to 8.0. Phosphate buffer liquid is prepared by mixing 11.5-12.5 g dipotassium hydrogen phosphate and 3-3.5 g potassium dihydrogen phosphate and dissolved in 1000 ml distilled water to obtain the phosphate buffer (pH 8.0). Color developing agent is prepared by mixing 140-170 mg 5,5-dithiobis-2-dinitrobenzoic acid (DTNB) and 14.8-16.4 mg sodium bicarbonate and dissolved in 17-23 ml of phosphate buffer solution.
USE - Method for detecting pesticide residue (claimed).
ADVANTAGE - The method enables to detect pesticide residue quickly, reduces interference in detection result, and ensures sufficient sample after crushing and leaching.
主权项：
1.一种农药残留快速检测消除假阳性的检测方法，其特征在于具体包括以下步骤：
步骤a、测试试剂配制
首先分别配制好需要的试剂为pH8.0磷酸盐缓冲液、显色剂、底物和乙酰胆碱酯酶液， 起配置方法如下：
pH8.0磷酸盐缓冲液:取11.5-12.5g磷酸氢二钾（K2HPO4）和3-3.5g磷酸二氢钾 （KH2PO4），溶于1000ml蒸馏水中便得到pH8.0磷酸盐缓冲液；
显色剂：取140-170mg硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和14.8-16.4mg碳酸氢钠（NaHCO₃），用 17-23ml的上述磷酸盐缓冲液溶解，于2-5℃冰箱保存；
底物：取23-27mg硫代乙酰胆碱，加2.6-3.3ml蒸馏水溶解，摇匀后置于3-6℃冰箱保存；
乙酰胆碱酯酶液：根据酶的活性，用缓冲液溶解，摇匀后置于2-5℃冰箱保存；
其中酶液2.5-3.2min的吸光度变化应控制在0.3以上；
步骤b、样品前处理
（1）将选取的1.2-1.5g生姜与.1.2-1.5g大蒜用清水冲洗干净，注意不要破坏样本表面 组织；
（2）将经过以上步骤1处理好的生姜与大蒜用绞碎机绞碎，各称取分别绞碎后获得生姜 0.8-1.2g与0.8-1.2g大蒜，再加入5ml配置好的pH8.0磷酸盐缓冲液，充分振荡后，置于90- 120℃水浴锅中加热处理，热处理时分开进行，生姜的处理条件是90-120℃持续2-3min，大 蒜的处理条件是80-110℃持续1-2min；将热处理好的提取液放置室温25-28℃保存；
（3）：取上步骤2中放置于室温25-28℃保存的样品，放入离心管中，5000转每分钟的离 心机持续旋转0.9-1.2 min，处理完成后的清液加以18-20℃保存；
步骤C、检测判断
（1）空白对照液测试
取试管加入2-3ml磷酸盐缓冲液，再加入0.09-0.12ml乙酰胆碱酯酶液、0.3-0.5ml显色 剂，摇匀后放置于35-38℃恒温水浴锅存放15—20min，再加入0.08-0.11ml底物摇匀，马上 放人分光光度计于400-420nm处测定，记录下反应2.5-3.5min的吸光度变化值Δ Α0的数 值；
（2）样品液测试
取试管加入2-3ml经步骤b3处理好的样品液，再加入0.09-0.12ml乙酰胆碱酯酶液、 0.3-0.5ml显色剂，摇匀后放置于35-38℃恒温水浴锅存放15—20min，再加入0.08-0.11ml 底物摇匀，马上放人分光光度计于400-420nm处测定，记录下反应2.5-3.5min的吸光度变化 值Δ Αt的数值；
（3）计算判断
通过步骤1、2测得Δ Α0和Δ Αt的数值，用以下公式计算出酶抑制率（%）
抑制率（%）=[ ΔΑ0 - ΔΑt]/ ΔΑ0]×100………………（1）
（4）定性判定
当提取液的抑制率≧50%时，表示蔬菜中有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药存在， 样品为阳性。
申请号： CN201610769289.2
公开/公告号： CN106093032A
申请日：2016-08-31
公开/公告日：2016-11-09
申请/专利权人： 孟月志
发明/设计人： 林燕;孟月志
分类号： G01N21/78 G01N21/31 G01N1/28
主分类号： G01N21/78
法律状态：审中-实质审查
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