外文摘要：NOVELTY - A functionalized based iron oxide nanoparticles probe synthesizing method involves preparing a surface-carboxylated iron oxide nanoparticles by hydrothermal method, which is formed by the condensation reaction between amino groups on the polylysine with carboxyl groups on the iron oxide nanoparticles. The specific aptamer is connected with the obtained iron oxide nanoparticles to obtain a functionalized iron oxide nanoparticles probe.
USE - Method for synthesizing functionalized based iron oxide nanoparticles probe that is utilized for detecting the food-borne pathogenic bacteria, such as Gram-positive bacterium (all claimed).
ADVANTAGE - The functionalized based iron oxide nanoparticles probe has good stability, and can detect bacteria by naked eye which can be extended to field inspection, in simple, and cost effective manner, and ensures good potential to expand the application to the food-borne pathogens in the field testing.
主权项：
1.一种具有催化活性的功能化Fe 3O 4NPC probe的合成方法，其特征在于 包括如下步骤：
通过水热法合成表面羧基化的Fe 3O 4NP，通过聚赖氨酸上氨基与Fe 3O 4NP 上羧基之间进行缩合反应形成交联，从而形成Fe 3O 4NPC；特异性的适配体与得 到的Fe 3O 4NPC连接即得到功能化Fe 3O 4NPC probe。
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于：所述的Fe 3O 4NP，表面基 团：-COOH，粒径为200～300nm；
所述的聚赖氨酸分子量是30～70kDa。
3.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于：所述的Fe 3O 4NPC的合 成反应步骤如下：
1)将EDC通过涡旋溶解在PBS缓冲液，将Fe 3O 4NP加入其中，室温孵育 活化；
2)然后加入聚赖氨酸，4℃孵育过夜；
3)去除多余的未反应的PLL和EDC，Fe 3O 4NPC形成，将产物重分散在 PBS缓冲液中，4℃保存备用。
4.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于：所述的Fe 3O 4NPC probe 的制备反应步骤：
1)用EDC和NHS活化Fe 3O 4NPC，室温下活化；
2)用PBS缓冲液清洗产物后，活化的Fe 3O 4NPC与特异性的适配体孵育在 醋酸钠缓冲液中，反应孵育过夜，然后用PBS缓冲液清洗连接产物；
3)将产物重分散在Tris缓冲液中，室温下孵育，用PBS缓冲液清洗，重分 散在PBS缓冲液中储存在4℃备用。
5.根据权利要求1或4所述的合成方法，其特征在于：所述的特异性的适 配体的序列为：5'-NH 2-TTT TTT TTT TAT CCA TGG GGC GGA GAT GAG GGG GAG GAG GGC GGG TAC CCG GTT GAT-3'。
6.一种具有催化活性的功能化Fe 3O 4NPC probe，其特征在于通过权利要求 1～5任一项所述的制备方法得到。
7.一种基于Fe 3O 4NPC probe催化信号放大的可视化检测传感器的构建方 法，其特征在于具体步骤如下：
1)用EDC和NHS活化万古霉素；
2)向已活化的Van溶液中加入牛血清白蛋白溶液，4℃孵育过夜；
3)向BSA-Van混合液中加入Tris缓冲液终止反应；
4)用超滤管离心去除多余未反应的Van和EDC，转速为5000～7000rpm；
5)将BSA-Van加入到包被液中，用BSA-Van包被微孔板，震荡；
6)去除包被液，修饰的孔用清洗液清洗三次；然后用封闭液封闭微孔板， 室温下在振荡器上孵育；
7)去除封闭液，用清洗液清洗三次，最后每孔加上PBS，4℃保存备用， 基于Fe 3O 4NPC probe催化信号放大的可视化检测传感器构建完成。
8.一种基于Fe 3O 4NPC probe催化信号放大的可视化检测传感器，其特征 在于通过权利要求7所述的构建方法构建得到。
9.一种基于Fe 3O 4NPC probe催化信号放大的可视化检测传感器对食源性 致病菌进行快速和可视化检测的方法，其特征在于具体步骤如下：
1)检测食源性致病菌样品制备
培养食源性致病菌直至OD 600值达到1.0；取食源性致病菌菌液，离心， 去除培养基，用PBS缓冲液清洗三次，得到食源性致病菌细胞重分散在PBS缓 冲液中；并进行梯度稀释，得到各浓度检测菌液；
2)可视化检测传感器对食源性致病菌进行捕获
检测样品加入上述基于Fe 3O 4NPC probe催化信号放大的可视化检测传感器 中，室温下孵育，然后去除未捕获样品，用清洗液清洗三次；
3)Fe 3O 4NPC probe识别检测食源性致病菌
将Fe 3O 4NPC probe加入可视化检测传感器中，振荡器上孵育后去除未结合 探针，清洗三次；
4)对可视化检测传感器上捕获食源性致病菌进行比色检测
将显色底物加入可视化检测传感器中，在Fe 3O 4NPC probe的催化下，底物 变色，检测波长为652nm；结果也能通过催化产物的颜色变化进行裸眼检测。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：
所述的食源性致病菌为革兰氏阳性菌。
申请号： CN201610256776.9
公开/公告号： CN105954268A
申请日：2016-04-22
公开/公告日：2016-09-21
申请/专利权人： 华南师范大学
发明/设计人：周小明;邢达;张丽莎
分类号： G01N21/78 G01N1/28 G01N1/38
主分类号： G01N21/78
法律状态：审中-实质审查
点击下载：一种基于四氧化三铁纳米簇催化信号放大的可视化检测传感器及其构建与应用