中文摘要:一种高产脱氧雪腐镰刀菌烯醇的单敲除突变体菌株的构建方法,包括以下步骤:(1)利用split-PCR方法,将禾谷镰刀菌脱氧雪腐镰刀菌烯醇合成过程中的负调控因子高亲和性磷酸二酯酶基因FgPDE2从禾谷镰刀菌PH-1的基因组中敲除,获得单敲除突变体;FgPDE2的基因及上下游序列如SEQ?ID?NO:1所示;(2)采用PEG-介导的原生质体转化到禾谷镰刀菌中,然后采用抗性筛选标记筛选敲除转化子;最后以禾谷镰刀菌的基因组为参照,利用5F和6R引物验证敲除转化子的目的基因被新霉素抗性基因所替代。本发明单敲除突变体菌株产毒量大幅提高;而双敲除突变体菌株产毒量更高,且该基因改造突变体丧失了对小麦穗的侵染能力,大大降低了双敲除突变体菌株可能的扩散造成的不良后果。
主权项:一种高产脱氧雪腐镰刀菌烯醇的敲除突变体菌株的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)构建基因敲除载体:利用split?PCR方法,将禾谷镰刀菌脱氧雪腐镰刀菌烯醇合成过程中的负调控因子高亲和性磷酸二酯酶基因FgPDE2从禾谷镰刀菌PH?1的基因组中敲除,获得单敲除突变体;FgPDE2的基因及上下游序列如SEQ?ID?NO:1所示;(2)转化、筛选、鉴定:采用PEG?介导的原生质体转化到禾谷镰刀菌中,然后采用抗性筛选标记筛选敲除转化子;最后以禾谷镰刀菌的基因组为参照,利用5F和6R引物验证敲除转化子的目的基因被新霉素抗性基因所替代,即成。
申请号:CN201610041168.6
公开/公告号:CN105567726A
申请日:2016-01-21
公开/公告日:2016-05-11
申请/专利权人:西北农林科技大学
发明/设计人:江聪;刘慧泉;许金荣;等
分类号:C12N15/80
主分类号:C12N15/80
点击下载:一种高产脱氧雪腐镰刀菌烯醇的敲除突变体菌株的构建方法