中文摘要：本发明涉及一种同时检测玉米中产AFB1、ZEN、DON真菌的方法，对玉米样品中的DNA进行提取，分别根据编码AFB1、ZEN、DON合成的基因aflR、PKS13、tri5筛选了三对引物组合，并筛选出三种引物组合的多重PCR反应条件，并采用多重PCR法对所提取的DNA中的三个目的基因进行扩增，从而建立了一种能够同时快速检测玉米中三种产毒素真菌的方法。
主权项：一种同时检测玉米中产黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素真菌的方法，其特征在于所采用的引物组合为：一对针对aflR的特异性引物SEQ1和SEQ2；一对针对PKS13的特异性引物SEQ3和SEQ4；一对针对tri5的特异性引物SEQ5和SEQ6；SEQ1：5'?GCACCCTGTCTTCCCTAACA?3'SEQ2：5'?ACGACCATGCTCAGCAAGTA?3'SEQ3：5'?CTGAGAAATATCGCTACACTACCGAC?3'SEQ4：5'?CCCACTCAGGTTGATTTTCGTC?3'SEQ5：5'?GCTGCTCATCACTTTGCTCAG?3'SEQ6：5'?CTGATCTGGTCACGCTCATC?3'上述引物组合的使用方法如下：1)常规方法提取玉米样品DNA,进行PCR反应；反应体系为：10×Taq?PCR?Buffer(含Mg2+)：2.5μL；dNTP?Mix(2.5mM?each)：2.0μL；引物aflR、PKS13、tri5的上游引物各1.0μL，下游引物各1.0μL；提取到的DNA：500ng；Taq?DNA酶(5U/μL)：0.25μL；用不含RNA酶的灭菌水定容至25μL。多重PCR扩增程序如下：首轮循环：预变性，94℃，2min；中间循环：变性，94℃，30s；复性，60℃，30s；延伸，72℃，30s；进行30个循环末轮循环：延伸，72℃，10min；2)对步骤2)得到的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶检测:如果从样品中扩增出192bp的产物，则待检玉米样品中有产生ZEN的真菌；如果从样品中扩增出400bp的产物，则待检玉米样品中有产生AFB1的真菌；如果从样品中扩增出658bp的产物，则待检玉米样品中有产生DON的真菌。
申请号：CN201410432481.3
公开/公告号：CN104152574A
申请日：2014-08-27
公开/公告日：2014-11-19
申请/专利权人：山东农业大学
发明/设计人：林海 ; 焦洪超 ; 伏春燕 ; 宋志刚
分类号：C12Q1/68 ; C12Q1/04
主分类号：C12Q1/68
法律状态：失效专利
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