中文摘要：本发明提供一种猪肺炎支原体双抗体夹心ELISA活菌滴度测定方法，以解决猪肺炎支原体传统定量检测方法费时长的弊端。具体地，本发明的方法包括a包被，b封闭，c加样，d加酶标抗体，e显色，f终止和g结果判定的步骤。通过本发明实现了对猪肺炎支原体活菌滴度的测定，检测周期仅需1天，与常用的CCU计数法相比，大大缩短了生产周期，提高了生产效率；另外，本发明的特异性强，与絮状支原体、猪鼻支原体、猪滑液支原体进行ELISA检测无交叉反应；此外，本发明的重复性好，批内变异系数和批间变异系数均小于5%。
主权项：一种猪肺炎支原体活菌滴度测定方法，其特征在于包括以下步骤：a.包被：用包被液将抗P46蛋白单克隆抗体稀释，包被至96孔酶标板，4℃过夜；所述包被液为碳酸盐缓冲液；b.封闭：弃去包被液，用PBST洗涤，加入含脱脂奶粉的PBS作为封闭液，100250μl/孔，37℃作用0.52h；所述PBST溶液为含0.05%Tween20的PBS溶液；c.加样：弃去封闭液，用PBST洗涤后分别加入阴性和阳性对照样品、标准品、待检样品，80150μl/孔，37℃孵育0.52h；阴性对照样品为A26液体培养基，阳性对照样品为猪肺炎支原体菌液，标准品为标记为S1至S6的不同活菌滴度的猪肺炎支原体菌液；d.加酶标抗体：弃去阴性和阳性对照样品、标准品、待检样品，用PBST洗涤后加入稀释的酶标抗体，80150μl/孔，37℃孵育0.52h；e.显色：弃去酶标抗体，用PBST洗涤后加入TMB底物显色液，80150μl/孔，室温避光反应530分。
 
申请号： CN201610620237.9
公开/公告号：CN106290887A
申请日：2016-08-01
公开/公告日：2017-01-04
申请/专利权人：瑞普(保定)生物药业有限公司
发明/设计人：张德宝 ; 高晓磊 ; 朱秀同 ; 刘涛 ; 郁宏伟 ; 梁武 ; 杨保收 ; 何平有 ; 徐步晗
分类号：G01N33/577
主分类号：G01N33/577
法律状态：实质审查
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