中文摘要：本发明公开了一种肺炎支原体恒温检测试剂盒，该试剂盒是一种基因在恒定温度下进行扩增和检测的试剂盒。本发明的恒温扩增体系，真正实现在同一个温度下进行基因扩增反应，反应体系不依赖于ATP、磷酸肌酸等高能能量分子，相对现有的恒温扩增体系，其组成更为简单，成本更为低廉，使用更为方便。本发明的恒温扩增体系适用于复杂模板的扩增，扩增速度快且稳定，可以在15?min以内完成扩增反应，扩增的灵敏度和准确性高，不易出现错配，扩增效果好。
 
主权项：1.一种肺炎支原体恒温检测试剂盒，包括反应液、启动液、反应酶系、上游引物和下游 引物，其特征在于：所述的反应酶系的成分包括单链结合蛋白、重组酶、肺炎支原体特异性 引物（上游引物和下游引物）等，其中，重组酶为不依赖于能量分子的重组酶。 2.根据权利要求1所述的一种肺炎支原体恒温检测试剂盒，其特征在于：其反应液成分 包括： Tris-缓冲液 20mM-100mM KCl 20mM-80mM (NH4)2SO4 0mM-100mM 甜菜碱 0M-2M Triton X-100 0%-1% PEG 1%-20% DMSO 0%-20% BSA 0mg/mL-1mg/mL 。 3.根据权利要求2所述的一种肺炎支原体恒温检测试剂盒，其特征在于：Tris-缓冲液可 选自Tris-H2SO4、Tris-乙酸、Tris-HCl中的任意一种或多种，Tris-缓冲液的pH为7.0～9.0。 4.根据权利要求1所述的一种肺炎支原体恒温检测试剂盒，其特征在于：其启动液成分 包括： Mg2+ 5mM~20mM 。 5.根据权利要求4所述的一种肺炎支原体恒温检测试剂盒，其特征在于：Mg2+来自于硫 酸镁、乙酸镁、氯化镁中的任意一种或多种。 6.根据权利要求1所述的一种肺炎支原体恒温检测试剂盒，其特征在于：其反应酶系成 分包括： dNTPs 150uM-500uM 聚合酶Bsu 10-100U 单链结合蛋白 200-700ng/ul 重组酶（E.coli RecT） 100-500ng/ul 上游引物 100-300nM 下游引物 100-300nM。 7.根据权利要求1或6所述的一种肺炎支原体恒温检测试剂盒，其特征在于：所述的上 游引物序列为：AGAACTTGAAGGTCAAGATGTTACTTGATCAAC；所述的下游引物序列为： GTTTTAGACCTAAATTTGCAAAACTTTCGTAAA。 8.根据权利要求1或6所述的一种肺炎支原体恒温检测试剂盒，其特征在于：重组酶选 自E.coli RecT蛋白；λ噬菌体β蛋白；啤酒酵母SepΙ/STPβ；啤酒酵母DPA蛋白；啤酒酵母STPα 蛋白；粟酒裂殖酵母p140/Exoǁ蛋白以及RrpΙ、HPP-Ι、v-SEP、ICP8蛋白。 9.据权利要求1、2、4、6所述的一种肺炎支原体恒温检测试剂盒，其特征在于：恒温扩增 的温度为35～42℃。
申请号：CN201710320480.3
公开/公告号：CN106916902A
申请日：2017-05-09
公开/公告日：2017-07-04
申请/专利权人：广州和实生物技术有限公司
发明/设计人：刘淑园;陈华云;肖湘文;丁渭;张天海;邓金萍
分类号：C12Q1/68;C12Q1/04
主分类号：C12Q1/68
法律状态：实质审查
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