中文摘要：一种水稻矮缩病毒抗体的制备方法属于病毒抗体制备技术领域，尤其涉及一种水稻矮缩病毒抗体的制备方法。本发明提供一种解决了大分子目的蛋白通常不易诱导问题的水稻矮缩病毒抗体的制备方法。本发明包括以下步骤。1)阳性菌株按1:100接种于两管含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中，摇菌3-4h，诱导培养4-5h，另一试管中不添加IPTG作为对照；取菌液并收集菌体，经凝胶电泳分离后置于考马斯亮蓝染色液；2)诱导100ml菌液，收集菌体，目的蛋白经凝胶电泳，电泳后的凝胶经KCL预冷处理得到乳白色蛋白条带，将目的蛋白条带用刀片切割回收，加入弗氏佐剂研磨至乳化状，保存备用。
主权项：一种水稻矮缩病毒抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）阳性菌株按1:100接种于两管含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中，摇菌3-4h，诱导培养4-5h，另一试管中不添加IPTG作为对照；取菌液并收集菌体，经凝胶电泳分离后置于考马斯亮蓝染色液；2）诱导100ml菌液，收集菌体，目的蛋白经凝胶电泳，电泳后的凝胶经KCL预冷处理得到乳白色蛋白条带，将目的蛋白条带用刀片切割回收，加入弗氏佐剂研磨至乳化状，保存备用；3）提取SRBSDV侵染的水稻病株和健康水稻植株总蛋白，经凝胶电泳分离后转印到PVDF膜上，室温摇床上封闭1h后，用PBST洗三遍；将PVDF膜置于1:1000稀释的P6抗血清中孵育；再用PBST洗三遍后，放入1:30000稀释的抗体中孵育1h；将PVDF膜用PBST洗三遍后放入显色液中避光显色；4）取无毒白背飞虱飞虱若虫在SRBSDV侵染的水稻病株上饲毒2d，随后转到健康水稻上饲养；以荧光抗体和染料孵育1h。
申请号：CN201510396409.4
公开/公告号：CN106317223A
申请日：2015-07-08
公开/公告日：2017-01-11
申请/专利权人：刘铮
发明/设计人：刘铮
分类号：C07K16/10
主分类号：C07K16/10
法律状态：公开
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